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實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及在我衛(wèi)生應(yīng)急中的應(yīng)用

日期：2024-11-23 21:57

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摘要：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡(jiǎn)稱Real Time PCR，如果用于RNA檢測(cè)，這被稱為逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)PCR即Real-time RT-PCR）是實(shí)時(shí)PCR法，它是指對(duì)DNA或經(jīng)過反轉(zhuǎn)入（RT-PCR）的RNA通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)并實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的放大過程，在擴(kuò)增的指數(shù)增長期就測(cè)量擴(kuò)增產(chǎn)物，因?yàn)閿U(kuò)增指數(shù)增長期測(cè)量值與特異DNA（RNA）起始量存在相關(guān)性，從而實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。

Real Time PCR的基本目標(biāo)是測(cè)量和鑒別非常微量的特異性核酸，從而可通過監(jiān)測(cè)CT值而實(shí)現(xiàn)對(duì)原始目標(biāo)基因的含量定量。目前被普遍使用的多種常規(guī)PCR方法如各種凝膠電泳PCR法，終點(diǎn)熒光定量法或PCR-ELISA法叫做終點(diǎn)PCR法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法大的點(diǎn)是克服了終點(diǎn)PCR法進(jìn)入平臺(tái)期或叫飽和期后定量的較大誤差，實(shí)現(xiàn)DNA/RNA的定量。

普通PCR技術(shù)發(fā)明于1983年，而實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)發(fā)明于上世紀(jì)九十年代并于1996年生產(chǎn)出了上第臺(tái)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)的技術(shù)要素主要有熒光定量PCR試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，我熒光定量PCR試劑盒研發(fā)實(shí)力強(qiáng)大，生產(chǎn)廠較多，臨床診斷的品種如HBV/HCV及禽流感診斷試劑盒性能良、供應(yīng)充足，基本實(shí)現(xiàn)產(chǎn)化。在豬流感病毒RNA核酸序列明確的情況下，利用現(xiàn)有的試劑研發(fā)平臺(tái)，人感染豬流感實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷試劑盒很快就會(huì)面世。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀由于技術(shù)含量，只有少數(shù)幾中企業(yè)有能力生產(chǎn)如西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL-988系列儀器不但取得了發(fā)明、科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)、重點(diǎn)新產(chǎn)品證書、醫(yī)療器械注冊(cè)證，而且被發(fā)改委確立為技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程2008年生物醫(yī)學(xué)工程專項(xiàng)，產(chǎn)品性能達(dá)到際先進(jìn)水平，在乳品檢測(cè)行業(yè)市場(chǎng)占有率比進(jìn)口儀器還[1-3]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀應(yīng)用廣泛，1999年開始，西方發(fā)達(dá)嘗試將PCR應(yīng)用于臨床傳染病診斷、食品**檢測(cè)以及血液篩查，目前已相當(dāng)普及。2008年12月13日中衛(wèi)生部下發(fā)《衛(wèi)生應(yīng)急隊(duì)伍裝備參考目錄》（衛(wèi)辦應(yīng)急發(fā)[2008]207號(hào)），其中要求縣以上衛(wèi)生應(yīng)急隊(duì)伍建設(shè)中必須配備PCR儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀作為傳染病控制類裝備。

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