如何分析電泳

那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于如何分析電泳:

在凝膠電泳儀中，DNA或蛋白質(zhì)樣品的分離（通?；诖笮。┦峭ㄟ^(guò)施加電場(chǎng)使它們遷移通過(guò)凝膠來(lái)分離的。凝膠電泳在生物醫(yī)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室中是常規(guī)操作，可用于回答各種不同的問(wèn)題，因此，實(shí)際上并沒(méi)有一種通用的方法來(lái)分析結(jié)果。

例如，諸如蛋白質(zhì)印跡，RNA印跡和DNA印跡的不同技術(shù)都涉及凝膠電泳。

如果您要進(jìn)行DNA樣品的瓊脂糖凝膠電泳（常見(jiàn)的一種方法），通常需要至少做兩件事：1）區(qū)分未切割的質(zhì)粒與插入片段，帶切口的質(zhì)粒和切割的質(zhì)粒，以及2）估計(jì)使用標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel或計(jì)算器計(jì)算各種DNA片段的大小。

運(yùn)作方式如下。

檢查您的實(shí)驗(yàn)室筆記本以確定哪些樣品已裝入哪些通道。當(dāng)裝載凝膠孔時(shí)，您應(yīng)該注意每個(gè)泳道/樣品的身份。

確定哪個(gè)泳道包含DNA標(biāo)準(zhǔn)的“階梯”。這些是已知長(zhǎng)度的片段。它們的遷移距離可用于通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel或其他計(jì)算器確定樣品片段的大小。

用尺子測(cè)量從孔到跟蹤染料的圖像距離，該染料比任何DNA條帶都行進(jìn)的距離遠(yuǎn)（換句話說(shuō)，它將位于凝膠的底部）。記錄此數(shù)字-您使用的單位并不重要。

測(cè)量照片上從孔到“階梯”中每個(gè)帶的距離，然后用該距離除以跟蹤染料帶所經(jīng)過(guò)的距離。此計(jì)算為您提供每個(gè)頻段的相對(duì)遷移率。

示例：假設(shè)跟蹤染料帶移動(dòng)了6英寸，而我們有三個(gè)帶移動(dòng)了5、4.5和3.5英寸。

他們的相對(duì)流動(dòng)性是什么？答：我們將5、4.5和3.5除以6得到的相對(duì)遷移率分別為0.833、0.75和0.5833。

將相對(duì)遷移率輸入到電子表格程序（Excel或您使用的任何其他類(lèi)似程序）中，并將階梯中每個(gè)片段的大?。ㄒ郧A基為單位）一起輸入。

制造商會(huì)為您提供他們提供的梯子中每個(gè)碎片的大小，因此您應(yīng)該已經(jīng)有了此信息。

在x上繪制具有相對(duì)移動(dòng)性的數(shù)據(jù)，在y上繪制以千為單位的大小的數(shù)據(jù)。

在電子表格程序上使用趨勢(shì)線函數(shù)將方程擬合到數(shù)據(jù)中。該方程式應(yīng)為冪方程式（例如x ^ -2），并且應(yīng)相對(duì)較好地?cái)M合數(shù)據(jù)（R系數(shù)至少為0.9）。這將創(chuàng)建一條曲線和一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel。

查看與您的樣本相對(duì)應(yīng)的譜帶。

請(qǐng)記住，較小的DNA片段比較大的DNA片段穿過(guò)凝膠的距離更遠(yuǎn)，因此靠近跟蹤染料的片段將小。但是請(qǐng)注意，如果未切割質(zhì)粒（環(huán)狀）DNA，它將像電話線一樣“超螺旋”或扭曲，這實(shí)際上會(huì)使它比相同大小的線性DNA傳播得更遠(yuǎn)。

同樣，未完全切割的“切口”質(zhì)粒將比相同大小的線性DNA傳播更短的距離。因此，您無(wú)法從凝膠中估計(jì)未切割質(zhì)粒的大小。

將每個(gè)泳道中的條帶與您在該泳道中加載的樣品的標(biāo)識(shí)相匹配，并確定您所看到的是否是您所期望的。這將取決于實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)。

但是，一般來(lái)說(shuō)，如果您用兩種限制性酶消化插入質(zhì)粒，則可以預(yù)期該插入物中將沒(méi)有質(zhì)粒。

由于它比質(zhì)粒小得多，您可能會(huì)在該泳道中看到兩條帶，一條靠近頂部，而另一條靠近底部。僅用一種限制酶切割的質(zhì)粒應(yīng)僅形成一條條帶，該條帶比用兩種限制酶切割的質(zhì)粒行進(jìn)的距離要遠(yuǎn)一些，但不能遠(yuǎn)至插入片段。

測(cè)量從孔到切出的質(zhì)粒的距離，并用尺子插入條帶。將這些數(shù)字除以跟蹤染料的行進(jìn)距離，即可得出插入片段和切割質(zhì)粒的相對(duì)遷移率。

將插入片段和剪切質(zhì)粒的相對(duì)遷移率插入電子表格程序?yàn)槟?jì)算的方程式中。這種計(jì)算應(yīng)給您估計(jì)這些質(zhì)粒的大小。

以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于如何分析電泳。

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