如何計(jì)算DNA片段的長(zhǎng)度

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在測(cè)量比細(xì)胞小得多的DNA片段的長(zhǎng)度時(shí)，微生物學(xué)家需要技巧，而方便的方法是凝膠電泳儀。此方法依賴于DNA片段帶電的事實(shí)，它是更昂貴的方法（例如X射線晶體學(xué)）的替代方法，該方法負(fù)責(zé)發(fā)現(xiàn)DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。

凝膠電泳的工作原理

由于DNA分子帶電，因此會(huì)受到電流的影響。當(dāng)您將它們放在中性凝膠中并在凝膠上通電時(shí)，分子會(huì)向正極（陽(yáng)極）遷移。因?yàn)椴煌笮〉?/span>DNA分子帶有相同的電荷，所以較小的分子會(huì)更快地傳播，因此此過(guò)程將分子分成多個(gè)條帶，可以與已知大小的樣本進(jìn)行比較。

電泳基本程序

該凝膠通常由瓊脂糖制成，瓊脂糖是一種多糖，在緩沖溶液中加熱后會(huì)形成半固體，微孔凝膠。在一端，凝膠形成微小的凹痕，稱為孔，研究人員將研究中的DNA樣品與已知長(zhǎng)度的參考樣品（稱為DNA階梯）放置在一起。階梯片段的長(zhǎng)度已經(jīng)通過(guò)另一種方法例如X射線晶體學(xué)來(lái)預(yù)定。

當(dāng)凝膠浸入導(dǎo)電溶液中并施加電壓時(shí)，碎片開始遷移通過(guò)凝膠-先是較小的碎片，然后是較大的較慢的碎片。它們終根據(jù)大小形成類似頻譜的波段。

一旦發(fā)生這種情況，研究人員將關(guān)閉電源，用DVA結(jié)合染料注入凝膠，并在紫外線下檢查樣本。使用梯子作為參考，研究人員可以確定可見帶中每個(gè)片段的大小。只有條帶可見–單個(gè)DNA片段太小而看不見。

確定未知片段的長(zhǎng)度

并非樣品中的每個(gè)譜帶都有可能與階梯上的譜帶配對(duì)，因此，為了確定這些未知片段的大小，科學(xué)家通常會(huì)繪制一個(gè)圖。x軸上的是梯子中每個(gè)頻段的行進(jìn)距離（以毫米為單位），而y軸上的是每個(gè)頻段的大小。當(dāng)這些點(diǎn)通過(guò)曲線連接時(shí)，在測(cè)量該帶行進(jìn)的距離（以毫米為單位）后，可以從曲線中推斷出任何帶的大小。

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