蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、雙光束核酸蛋白檢測儀、紫外分析儀、紫外檢測儀、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為**的十幾個(gè)產(chǎn)品系列
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PCR新手指南：快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別
日期：2024-11-25 22:41
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摘要：在PCR儀上完成個(gè)PCR反應(yīng)所需要的時(shí)間決定于以下幾個(gè)因素：
1、模塊升溫和降溫時(shí)間
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間
3、延伸時(shí)間
4、循環(huán)次數(shù)
下面就以上幾點(diǎn)做點(diǎn)分析，以便大了解快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別。
1、模塊升溫和降溫度時(shí)間
PCR儀般會(huì)標(biāo)明升溫速度和降溫速度，但標(biāo)的大多是大變溫速度，也就是說是瞬間達(dá)到的速度。而與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的平均升降溫速度只有少量廠標(biāo)明。以平均2度和4度（能做到平均升降溫4度的儀器少）來計(jì)算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每個(gè)循環(huán)差20秒鐘。以般35個(gè)循環(huán)來計(jì)算，...
在PCR儀上完成個(gè)PCR反應(yīng)所需要的時(shí)間決定于以下幾個(gè)因素：
1、模塊升溫和降溫時(shí)間
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間
3、延伸時(shí)間
4、循環(huán)次數(shù)
下面就以上幾點(diǎn)做點(diǎn)分析，以便大了解快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別。
1、模塊升溫和降溫度時(shí)間
PCR儀般會(huì)標(biāo)明升溫速度和降溫速度，但標(biāo)的大多是大變溫速度，也就是說是瞬間達(dá)到的速度。而與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的平均升降溫速度只有少量廠標(biāo)明。以平均2度和4度（能做到平均升降溫4度的儀器少）來計(jì)算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每個(gè)循環(huán)差20秒鐘。以般35個(gè)循環(huán)來計(jì)算，影響實(shí)驗(yàn)時(shí)間700秒，也就是不到12分鐘。實(shí)際還要考慮過沖問題，影響時(shí)間還會(huì)少些。
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間
模塊溫度達(dá)到后，PCR管內(nèi)的溫度遠(yuǎn)沒有達(dá)到（塑料和水的導(dǎo)熱系數(shù)比鋁塊差300倍以上），需要時(shí)間來使者達(dá)到平衡。般有四種辦法來減少這時(shí)間，是讓模塊溫度過沖，在管內(nèi)溫度快達(dá)到時(shí)降到目標(biāo)溫度，但太的過沖可能造成實(shí)際溫度過沖，影響PCR反應(yīng)結(jié)果；是減少PCR反應(yīng)液的體積，但體積變小時(shí)PCR反應(yīng)的可靠性會(huì)降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄時(shí)強(qiáng)度不夠；四是增加PCR管與模塊貼附程度。
3、延伸時(shí)間
延伸時(shí)間與PCR產(chǎn)物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關(guān)。如果PCR產(chǎn)物長度少于100bp時(shí)，可能考慮將延伸時(shí)間變?yōu)?（即兩步法）；采用速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR實(shí)驗(yàn)都可以用速的DNA聚合酶。
4、循環(huán)次數(shù)
循環(huán)次數(shù)與模板量及檢測要求相關(guān)。
所謂快速PCR技術(shù)是將快速PCR儀與超薄管（或特殊貼附技術(shù)）以及速DNA聚合酶等技術(shù)整合在起，可達(dá)到較短時(shí)間完成PCR反應(yīng)。而些廠在向用戶推銷PCR儀時(shí)，不去說明快速PCR技術(shù)，只強(qiáng)調(diào)PCR儀速度快（大都用大升降溫速度來HuYou用戶）。好像買了快速PCR儀后，原來1個(gè)半小時(shí)的擴(kuò)增時(shí)間變會(huì)縮短成半小時(shí)似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發(fā)現(xiàn)并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。特別是進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增的用戶，如公安系統(tǒng)用于身份鑒定的試劑。
1、模塊升溫和降溫時(shí)間
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間
3、延伸時(shí)間
4、循環(huán)次數(shù)
下面就以上幾點(diǎn)做點(diǎn)分析，以便大了解快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別。
1、模塊升溫和降溫度時(shí)間
PCR儀般會(huì)標(biāo)明升溫速度和降溫速度，但標(biāo)的大多是大變溫速度，也就是說是瞬間達(dá)到的速度。而與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的平均升降溫速度只有少量廠標(biāo)明。以平均2度和4度（能做到平均升降溫4度的儀器少）來計(jì)算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每個(gè)循環(huán)差20秒鐘。以般35個(gè)循環(huán)來計(jì)算，影響實(shí)驗(yàn)時(shí)間700秒，也就是不到12分鐘。實(shí)際還要考慮過沖問題，影響時(shí)間還會(huì)少些。
2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間
模塊溫度達(dá)到后，PCR管內(nèi)的溫度遠(yuǎn)沒有達(dá)到（塑料和水的導(dǎo)熱系數(shù)比鋁塊差300倍以上），需要時(shí)間來使者達(dá)到平衡。般有四種辦法來減少這時(shí)間，是讓模塊溫度過沖，在管內(nèi)溫度快達(dá)到時(shí)降到目標(biāo)溫度，但太的過沖可能造成實(shí)際溫度過沖，影響PCR反應(yīng)結(jié)果；是減少PCR反應(yīng)液的體積，但體積變小時(shí)PCR反應(yīng)的可靠性會(huì)降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄時(shí)強(qiáng)度不夠；四是增加PCR管與模塊貼附程度。
3、延伸時(shí)間
延伸時(shí)間與PCR產(chǎn)物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關(guān)。如果PCR產(chǎn)物長度少于100bp時(shí)，可能考慮將延伸時(shí)間變?yōu)?（即兩步法）；采用速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR實(shí)驗(yàn)都可以用速的DNA聚合酶。
4、循環(huán)次數(shù)
循環(huán)次數(shù)與模板量及檢測要求相關(guān)。
所謂快速PCR技術(shù)是將快速PCR儀與超薄管（或特殊貼附技術(shù)）以及速DNA聚合酶等技術(shù)整合在起，可達(dá)到較短時(shí)間完成PCR反應(yīng)。而些廠在向用戶推銷PCR儀時(shí)，不去說明快速PCR技術(shù)，只強(qiáng)調(diào)PCR儀速度快（大都用大升降溫速度來HuYou用戶）。好像買了快速PCR儀后，原來1個(gè)半小時(shí)的擴(kuò)增時(shí)間變會(huì)縮短成半小時(shí)似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發(fā)現(xiàn)并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。特別是進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增的用戶，如公安系統(tǒng)用于身份鑒定的試劑。
快速PCR技術(shù)與快速PCR儀是兩回事?？焖貾CR儀多只能縮短PCR反應(yīng)時(shí)間10分鐘左右，要實(shí)現(xiàn)真正的快速PCR反應(yīng)，還需要其他些努力。大多數(shù)用戶根本就不需要快速PCR技術(shù)。
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