簡單介紹一下，核酸濃度測量的230、260、280

那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于核酸濃度測量的230、260、280：

在核酸、蛋白濃度檢測過程中，230nm、260nm、280nm這幾個(gè)數(shù)值經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)，那這幾個(gè)數(shù)值代表什么？他們之間的*優(yōu)關(guān)系又是什么呢？

數(shù)值的意義：

230nm：碳水化合物*高吸收峰的吸收波長，與A260的比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估。A230產(chǎn)生負(fù)值可能是由于在低核酸濃度的樣液中存在一些干擾成分。

260nm：核酸*高吸收峰的吸收波長，其吸收紫外光的性質(zhì)是嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵系統(tǒng)所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它們的物質(zhì)，不論是核苷、核苷酸或核酸在260nm處都會(huì)一個(gè)*高吸收峰。

280nm：蛋白質(zhì)由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光，通常蛋白質(zhì)的吸收高峰在280nm波長處。其與260nm處的吸光度比值，經(jīng)常被用于判斷核酸樣品的純度。

除了這三個(gè)常見的波長外，在核酸檢測過程中340nm往往會(huì)被用來檢測樣品緩沖液的濁度和其他干擾因子。該值應(yīng)該接近0.0，如果不是，表明溶液中有懸浮物。

圖為 核酸、蛋白質(zhì)吸光度譜

比值的意義：

260/230、260/280

純度好的DNA或RNA，在pH7-8.5下：

A260 / A280比值應(yīng)大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。

如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。

較純凈的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之間。

比值降低往往是樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、鹽（胍鹽）等。

但實(shí)際樣品情況往往要相對復(fù)雜，如《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版)所述，當(dāng) 0.5％BSA蛋白質(zhì)污染時(shí)，A260和A280的數(shù)值都下降，其結(jié)果是260/280的比值略微下降。但同時(shí)，蛋白殘留會(huì)導(dǎo)致A230的數(shù)值明顯上升，進(jìn)而顯著影響260/230的比值。也就是說，如果樣品的260/280比值略低于標(biāo)準(zhǔn)值，但260 /230下降明顯，那么就應(yīng)該考慮污染原因是蛋白殘留，而不是胍鹽殘留。

酚的*大吸收峰在270nm。酚的殘留會(huì)增加A230、A260和A280的數(shù)值，同時(shí)酚的吸收峰與核酸的吸收峰合并后，*大吸收峰會(huì)出現(xiàn)在270nm附近。因此當(dāng)樣品*大吸收峰會(huì)出現(xiàn)在270nm附近，且260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5，那么污染原因就應(yīng)該考慮是酚殘留。

胍鹽會(huì)在小于230nm處產(chǎn)生大的吸收峰，進(jìn)而顯著影響260/230比值，但胍鹽殘留不會(huì)影響A260、A280的數(shù)值，以及260/280的比值。也就是說，如果核酸樣品的260/280符合要求，但260/230<1，那么污染原因就應(yīng)該考慮是胍鹽殘留。

以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于核酸濃度測量的230、260、280。

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